Question

6．在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤．為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按如圖程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從物理性質(zhì)和用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是固體培養(yǎng)基和以除草劑作為唯一氮源．制備培養(yǎng)基時的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌．
（3）在劃線培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細菌的生長．
（4）在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是氮氣，有透明帶菌落利用的氮源主要是該除草劑，據(jù)此可篩選出目的菌
（5）該選育過程的接種方法是平板劃線法．
（6）科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株A和B，然后對突變株A和B進行實驗，結(jié)果如下表所示：

接種的菌種	一般培養(yǎng)基	實驗處理及結(jié)果
A	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長
B	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長
A+B	能生長	不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長

突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因是突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶　突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供．突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基的類型
（1）按物理性質(zhì)分：

名稱	特征	功能
固體培養(yǎng)基	外觀顯固體狀態(tài)的培養(yǎng)基	主要用于微生物的分離、鑒定
液體培養(yǎng)基	呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基	主要用于工業(yè)生產(chǎn)

（2）按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）從物理性質(zhì)方面來看，題圖培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；要篩選能分解除草劑的細菌，應(yīng)以該除草劑作為唯一氮源的培養(yǎng)基，不能降解該除草劑的細菌（除具有固氮能力的細菌外）在該培養(yǎng)基上是不能生長的．
（3）在以該除草劑作為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細菌（除具有固氮能力的細菌外）是不能生長的．
（4）含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明，形成透明帶是由于該除草劑被某些細菌降解．
（5）根據(jù)圖解可知，該選育過程的接種方法是平板劃線法．
（6）突變株A的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)乙．不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲和乙，二者混合培養(yǎng)時都能生長，最可能的原因是突變株A為突變株B提供了營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株B為突變株A提供了營養(yǎng)物質(zhì)甲．
故答案為：
（1）稀釋
（2）固體培養(yǎng)基        以除草劑作為唯一氮源          高壓蒸汽滅菌
（3）培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源
（4）氮氣     該除草劑
（5）平板劃線法
（6）突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶　突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供

點評 本題考查微生物培養(yǎng)的實驗，解答此類題目的關(guān)鍵是對土壤中微生物的分離與計數(shù)這個實驗的熟練掌握，和在微生物實驗中的無菌操作相關(guān)知識的熟練應(yīng)用．