Question

下圖是利用基因工程技術生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？     。
原因是                                                    。
（2）過程②稱為                   。
（3）為使過程⑧更易進行，可用      處理D。
（4）下圖為上圖中質(zhì)粒B的簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。

①將上述連接產(chǎn)物導入無任何抗藥性的大腸桿菌細胞中然后接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的大腸桿菌所含有的連接產(chǎn)物是                         。（2分，）
②在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是                 。
（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴增，那么在此過程中所使用的酶是             。（2分）除酶外還需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

Answer 1

（1）不能 皮膚細胞中的胰島素基因未表達（或未轉錄），不能形成胰島素mRNA
（2）反轉錄（逆轉錄）   （3）Ca²⁺ （4）① 目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物 （2分，答對一個只給一半分）     ②EcoRI和BamHI （2分）
（5）耐熱DNA聚合酶（2分）
使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸（2分） 

解析試題分析：皮膚細胞中的胰島素基因未表達不能形成胰島素mRNA，所以不能用人的皮膚細胞來通過反轉錄的方法獲取目的基因，用Ca²⁺處理受體細胞后有利于基因表達載體的導入。目的基因與質(zhì)粒結合后有三種產(chǎn)物：目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物、目的基因——目的基因，其中含有青霉素抗性基因的是目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物。用EcoRI和BamHI酶切后產(chǎn)生的末端不同，可以防止末端發(fā)生任意連接。PCR技術用到的酶是耐熱DNA聚合酶，引物作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
考點：基因工程
點評：本題考察了學生的理解分析能力，難度較大，解題的關鍵是理解目的基因與質(zhì)粒結合時有三種情況。