Question

11．柴油是重要的燃料油之一，也因泄露與不當排放等造成了嚴重的環(huán)境污染．科研人員從遭受柴油污染的土壤樣品中取土樣5g，加入含100mL培養(yǎng)基M的錐形瓶中，在30℃條件下震蕩培養(yǎng)5天，取出5mL培養(yǎng)液接種到相同的新鮮培養(yǎng)基，按此步驟連續(xù)培養(yǎng)5次，分離獲得醋酸鈣不動桿菌DB（一種柴油降解菌）．利用該菌，科研人員進一步探索其降解柴油的最佳條件，獲得實驗結果如圖．請回答下列問題：

（1）為獲得醋酸鈣不動桿菌DB，培養(yǎng)基M應以柴油為唯一碳源，還要考慮無機鹽的種類和比例．
（2）在實驗過程中，科研人員“30℃條件下震蕩培養(yǎng)5天，取出5mL培養(yǎng)液接種到相同的新鮮培養(yǎng)基，按此步驟，連續(xù)培養(yǎng)5次”的主要目的是使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或“使柴油分解菌富集”）．
（3）在分離醋酸鈣不動桿菌DB操作時，在嚴格無菌條件下，采用平板劃線法（填接種方法）在制備好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上進行接種，接種完，對接種環(huán)進行灼燒滅菌處理．培養(yǎng)一段時間后，觀察、挑取平板上形態(tài)、顏色、大小和隆起度等一致的菌落進行重復培養(yǎng)，直到分離出單一菌株．
（4）據圖分析，若某地區(qū)土壤發(fā)生柴油重度污染時，則可以將對被柴油重度污染的土壤進行稀釋，使柴油濃度降低至4000mg•kg^-1左右，并添加濃度為6mg．g^-1的表面活性劑，以有利于提高對柴油的降解效果．

Answer 1

分析 分析圖1：隨著柴油添加量的增加，柴油的降解率呈先增加后下降的趨勢，即在4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高．
分析圖2：隨著表面活性劑的濃度的上升，柴油的降解率呈不斷增加的趨勢，圖中表面活性劑的濃度為6mg．g^-1左右時降解率最高．

解答 解：（1）分析題意可知，醋酸鈣不動桿菌DB是一種柴油降解菌，因此為獲得醋酸鈣不動桿菌DB，培養(yǎng)基M應以柴油為唯一碳源，還要考慮無機鹽的種類和比例．
（2）在實驗過程中，科研人員“30℃條件下震蕩培養(yǎng)5天，取出5mL培養(yǎng)液接種到相同的新鮮培養(yǎng)基，按此步驟，連續(xù)培養(yǎng)5次”的主要目的是使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或使柴油分解菌富集）．
（3）在分離醋酸鈣不動桿菌DB操作時，在嚴格無菌條件下，采用平板劃線法或稀釋涂布平板法在制備好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上進行接種，接種完，對接種環(huán)進行灼燒滅菌處理．培養(yǎng)一段時間后，觀察、挑取平板上形態(tài)、顏色、大小和隆起度等一致的菌落進行重復培養(yǎng)，直到分離出單一菌株．
（4）根據柱形圖結果可知，在柴油添加量為4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高，表面活性劑的濃度為6mg．g^-1時降解率最高，因此若某地區(qū)土壤發(fā)生柴油重度污染時，則可以將對被柴油重度污染的土壤進行稀釋，使柴油濃度降低至4000mg．kg^-1左右，并添加濃度為6mg．g^-1的表面活性劑，以有利于提高對柴油的降解效果．
故答案為：
（1）柴油   種類
（2）使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或“使柴油分解菌富集”） 
（3）平板劃線法   灼燒    菌落
（4）6mg．g^-1

點評 本題考查了微生物分離和純化的有關知識，要求考生掌握選擇培養(yǎng)基在分離微生物的實驗過程中的運用，識記純化微生物的接種方法，能夠根據柱形圖中的信息提出有效的降解柴油污染的措施．