Question

【題目】如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側的序列，具體流程如下圖（以EcoR I酶切為例）：

請據(jù)圖回答問題：

（1）步驟I用的EcoR I是一種__________酶，它通過識別特定的__________切割特定位點。

（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成__________；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。

（3）若下表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是__________（從引物①②③④中選擇，填編號）。

	DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物	①5′- AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′- GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ③5′- AGAGGCTACGCATTGC-3′ ④5′- TCATGAGCGCATAGTT-3′

（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），結果正確的是_________________。

A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′

B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′

C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′

D． 5′- TTGATACGO----------CGAGTAC-3′

Answer 1

【答案】限制性核酸內切（或限制） 核苷酸序列 磷酸二酯鍵 DNA單鏈 以DNA為模板的DNA鏈的延伸 ②④ B

【解析】

采用PCR技術擴增DNA的過程為：變性、退火、延伸、終止，PCR技術擴增目的基因的原理：DNA雙鏈復制，引物是一小段單鏈DNA，引物5′端的堿基可以與DNA兩條鏈的3′端的堿基進行堿基互補配對，可作為DNA復制的起始點，子鏈的延伸方向從5′→3′。

（1）EcoR I是一種限制性核酸內切酶，它通過識別特定的核苷酸序列切割特定的位點。

（2）DNA連接酶可催化相鄰核苷酸之間的3'-羥基和5'-磷酸之間形成磷酸二酯鍵；PCR循環(huán)中，升溫到95℃時，DNA受熱變性后解旋為單鏈；Taq DNA聚合酶是一種耐高溫的依賴于DNA模板的DNA聚合酶，能催化以DNA鏈為模板的DNA鏈的延伸。

（3）引物是一小段單鏈DNA，引物5'端的堿基可以與DNA兩條鏈的3'端的堿基進行堿基互補配對，可作為DNA復制的起始點，子鏈的延伸方向從5'→3'，據(jù)題圖分析，結合已知序列可知，能與片段F左邊配對的引物為④，與右邊配對的引物為②，故步驟Ⅲ選用的PCR引物應當為②④。

（4）對PCR產(chǎn)物測序，得到片段F的完整序列，因為片段F是被限制酶EcoR I剪切的兩端，它識別的序列是GAATTC，且在G與A之間切割，所以5'端應該是AATTC，3'端是GAATT，故選B。