Question

【題目】轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ等四種限制酶切割位點。請回答：

（1）構(gòu)建含抗病基因的表達載體A時，應(yīng)選用限制酶____________ ，對__________進行切割。而后用___________酶處理。獲得重組質(zhì)粒A。

（2）將重組質(zhì)粒A與農(nóng)桿菌混合后，應(yīng)首先用________處理使其成為________細胞。

（3）培養(yǎng)基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，應(yīng)使基因表達載體A中含有_________，作為標(biāo)記基因。

（4）香蕉組織細胞具有________，因此，可以利用____________技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細胞的________和___________，B表示__________。

（5）若要鑒定抗病基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采用_______________檢測。

Answer 1

【答案】 PstI、EcoRI 質(zhì)粒和含抗病基因的DNA DNA連接酶 鈣離子 感受態(tài) 抗卡那霉素基因 全能性 植物組織培養(yǎng) 脫分化 再分化 愈傷組織 抗原—抗體雜交技術(shù)

【解析】【試題分析】

本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的具體操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的原理和過程，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱，再結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點，所以要獲得重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割。①表示脫分化過程、②表示再分化過程、B表示愈傷組織。

（1）含抗病基因的DNA上含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，但限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，用SmaⅠ位點進行切割會破壞抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點進行切割。要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA分子。而后用DNA連接酶處理，獲得重組質(zhì)粒A。

（2）將重組質(zhì)粒A與農(nóng)桿菌混合后，應(yīng)首先用鈣離子處理使其成為感受態(tài)細胞。

（3）培養(yǎng)基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，應(yīng)使基因表達載體A中含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因。

（4）香蕉組織細胞具有全能性，因此，可以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中①、②表示脫分化過程、②表示再分化過程，B表示愈傷組織。

（5）若要鑒定抗病基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測。