Question

【題目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果膠使細胞壁破損．番茄果實成熟中，PG合成顯著增加，能使果實變紅變軟，但不利于保鮮．利用基因工程的方法減少PG基因的表達，可延長果實保質期．科學家將PG基因反向接到Ti質粒上，導入到番茄細胞中，得到轉基因番茄．請據圖1回答：
（1）提取目的基因 ①若已獲取PG的mRNA，可通過獲取PG基因．
②在該基因上游加結構A可確保基因的反向轉錄，結構A上應具有結合位點．得到的目的基因兩側需人工合成BamHI黏性末端．已知BamHI的識別序列如圖2﹣甲所示，請在如圖2﹣乙相應位置上，畫出目的基因兩側的黏性末端．
③重組質粒轉化到大腸桿菌中的目的是 ．
（2）用含目的基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有的培養(yǎng)基進行篩選，與此同時，為能更好地達到培養(yǎng)目的，還需在培養(yǎng)基中加入 ． 培養(yǎng)24～48h后取樣，在質量分數為25%的蔗糖溶液中，觀察細胞現象來鑒別細胞壁是否再生．
（3）由于導入的目的基因能轉錄反義RNA，且能與互補結合，抑制PG基因的正常表達．若轉基因番茄的保質期比非轉基因番茄 ， 則可確定轉基因番茄成功．
（4）獲得的轉基因番茄產生的種子不一定保留目的基因，科研人員常采用方法使子代保持轉基因的優(yōu)良性狀．

Answer 1

【答案】
（1）逆轉錄（或cDNA文庫）； RNA聚合酶；大量復制目的基因（克隆目的基因）
（2）卡那霉素；植物激素（生長素和細胞分裂素）；是否發(fā)生質壁分離
（3）天然PG基因轉錄的Mrna；長
（4）植物組織培養(yǎng)
【解析】解：（1）①已獲取PG的mRNA，可通過逆轉錄或cDNA文庫的方法獲得目的基因．

②因轉錄的產物是mRNA，在轉錄時需要RNA聚合酶．根據限制酶BamHI的識別序列和切割位點可知，目的基因兩側的黏性末端如圖：

③重組質粒轉化到大腸桿菌中的目的是大量復制目的基因（克隆目的基因）．（2）由圖可知，標記基因是卡那霉素基因，因此用含目的基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有卡那霉素的培養(yǎng)基進行篩選．將轉基因植物細胞培育成轉基因植物需要采用植物組織培養(yǎng)技術，為能更好地達到培養(yǎng)目的，需在培養(yǎng)基中加入植物激素（生長素和細胞分裂素）．植物細胞在質量分數為25%的蔗糖溶液中會發(fā)生質壁分離現象，這可以用來鑒別細胞壁是否再生．（3）反義RNA一般是指與編碼鏈或有義鏈互補的DNA鏈編碼的RNA，mRNA是由編碼鏈或有義鏈編碼的RNA，所以反義RNA和mRNA分子能互補成雙鏈的RNA．由于核糖體不能翻譯雙鏈的RNA，所以反義RNA與mRNA特異性的互補結合，即抑制了該mRNA的翻譯；若轉基因番茄的保質期比非轉基因番茄長，則可確定轉基因番茄成功．（4）獲得的轉基因番茄產生的種子（是有性生殖的后代，會發(fā)生性狀分離）不一定保留目的基因，故要保持該優(yōu)良性狀，可采用無性生殖即植物組織培養(yǎng)的方法．

所以答案是：（1）①逆轉錄（或cDNA文庫）②RNA聚合酶③大量復制目的基因（克隆目的基因）（2）卡那霉素;植物激素（生長素和細胞分裂素）;是否發(fā)生質壁分離（3）天然PG基因轉錄的mRNA;長（4）植物組織培養(yǎng)

【考點精析】關于本題考查的基因工程的原理及技術，需要了解基因工程的原理是利用DNA重組技術才能得出正確答案．