Question

【題目】他莫昔芬（Tamoxifen）是治療乳腺癌的常用藥物，然而長期服用容易引起耐藥性。牛樟芝（AC）是一種傳統(tǒng)的藥用蘑菇提取物，科研人員用AC處理Tamoxifen抗性的乳腺癌細胞（MCF-7tamR），發(fā)現(xiàn)其可以緩解Tamoxifen的耐藥性，相關研究如下，請回答問題：

（1）乳腺癌發(fā)生的根本原因是外界致癌因子引起了________突變。

（2）科研人員在不同條件下培養(yǎng)MCF-7tamR細胞，分別于24h、48h測定細胞增長率，結果如圖1所示。

①體外培養(yǎng)MCF-7tamR細胞時，培養(yǎng)基中除水、糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子外，通常還需要加入______和抗生素；傳代培養(yǎng)時，貼滿瓶壁的細胞需要用_____等處理后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

②分析圖1結果，依據(jù)__________，可知AC和Tamoxifen聯(lián)合使用對于MCF-7tamR細胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細胞中兩種關鍵酶，前者抑制細胞凋亡，后者影響細胞代謝。兩種酶是基因通過___________過程指導合成的蛋白質。

（4）為進一步探明AC的作用機理，研究人員從100μg/ml AC處理24h的MCF-7tamR細胞中獲取mRNA，逆轉錄得到cDNA后，特異性擴增skp2和RhoA基因的片段，進行電泳檢測。結果如圖2所示。

①β-actin基因在不同細胞中轉錄水平相對穩(wěn)定，且表達量較高，在實驗中可消除______等無關變量對實驗結果的影響，常用作參照基因。

②由實驗結果可知，AC抑制了細胞中Skp2、RhoA基因的_______過程。據(jù)此推測AC的作用機制可能是__________。

Answer 1

【答案】原癌基因和抑癌基因 血清 胰蛋白酶 聯(lián)合使用AC和Tamoxifen時的細胞增長率，比單獨使用AC和Tamoxifen時低 轉錄和翻譯 檢測方法 轉錄 抑制Skp2、RhoA基因表達，促進MCF-7 tamR細胞凋亡，影響細胞代謝

【解析】

根據(jù)題意，AC可緩解Tamoxifen的耐藥性，根據(jù)表格中數(shù)據(jù)，比較Tamoxifen組、AC100μg/ml組、AC100μg/ml+Tamoxifen組對細胞增長率的影響，24h和48h的細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC100μg/ml組﹥AC100μg/ml+Tamoxifen組；比較Tamoxifen組、AC150μg/ml組、AC150μg/ml+Tamoxifen組對細胞增長率的影響，24h細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組≈AC150μg/ml+Tamoxifen組；48h細胞增長率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組；且48h細胞增長率AC100μg/ml+Tamoxifen組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組，說明施加AC確可緩解Tamoxifen的耐藥性且該效應與濃度有關，據(jù)此分析。

（1）乳腺癌發(fā)生的根本原因是外界致癌因子引起了原癌基因和抑癌基因突變。

（2）①體外培養(yǎng)MCF-7tamR細胞時，培養(yǎng)基中除水、糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子外，通常還需要加入血清和抗生素；傳代培養(yǎng)時，貼滿瓶壁的細胞需要用胰蛋白酶等處理后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

②分析圖1結果，聯(lián)合使用AC和Tamoxifen時的細胞增長率，比單獨使用AC和Tamoxifen時低，說明AC和Tamoxifen聯(lián)合使用對于MCF-7tamR細胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細胞中兩種關鍵酶，前者抑制細胞凋亡，后者影響細胞代謝。兩種酶是基因通過轉錄和翻譯過程指導合成的蛋白質。

（4）①β-actin基因在不同組細胞中轉錄水平相對穩(wěn)定，且表達量較高，在實驗中可消除檢測方法等無關變量對實驗結果的影響，常用作參照基因。

②由實驗結果可知，AC組細胞擴增出的Skp2、RhoA基因片段幾乎沒有，說明未獲取得到相關mRNA，推測AC抑制了細胞中Skp2、RhoA基因的轉錄過程。據(jù)此推測AC的作用機制可能是抑制Skp2、RhoA基因表達，從而促進MCF-7 tamR細胞凋亡，從而影響細胞代謝。