Question

【題目】下圖是轉(zhuǎn)基因小鼠的培育過程示意圖，是綠色熒光蛋白基因，請(qǐng)分析回答:

（1）過程①需要用到 酶。過程②將目的基因?qū)�人胚胎干�?xì)胞常用的方法是 。培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)液中除加人各種營養(yǎng)物質(zhì)外，通常還需加入 。

（2）表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因、 、 、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

（3）自然狀況下胚胎干細(xì)胞是由動(dòng)物的早期胚胎或 中分離出來的一類細(xì)胞胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，細(xì)胞核仁明顯;在功能上具有 性。

（4）圖中載體上的基因是B抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是B抗生素（對(duì)細(xì)胞有毒害作用），培養(yǎng)液添加G418的目的是 。

（5）圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入囊胚的 位置;步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是 。

（6）檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可從小鼠c體內(nèi)提取蛋白質(zhì)，用 雜交的方法加以檢測(cè)。

Answer 1

【答案】

（1）DNA連接酶 顯微注射法 血清

（2）標(biāo)記基因 啟動(dòng)子

（3）早期胚胎或原始性腺 發(fā)育的全能

（4）篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞

（5）內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 同期發(fā)情處理

（6）抗原-抗體雜交

【解析】

（1）構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和運(yùn)載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒，目的基因?qū)�人胚胎干�?xì)胞常用的方法是顯微注射法，體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，通常要加入血清等天然成分，除了保證被培養(yǎng)細(xì)胞處于無菌、無毒及充足氧氣的環(huán)境中，還需要保證細(xì)胞生活所需適宜的溫度和pH。

（2）表達(dá)載體包含目的基因（綠色熒光蛋白基因Gfp）、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

（3）胚胎干細(xì)胞來自于早期胚胎或原始性腺，早期胚胎或原始性腺屬于全能性細(xì)胞。

（4）步驟③所用的G418是一種抗生素，其作用是篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞。

（5）囊胚包括滋養(yǎng)層細(xì)胞和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞，其中滋養(yǎng)層細(xì)胞將發(fā)育成胎盤和胎膜，而內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞將發(fā)育成各種組織，因此圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位置；圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是同期發(fā)情處理。（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 標(biāo)記基因 啟動(dòng)子

（2）篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 同期發(fā)情處理

（5）抗原-抗體雜交

（6）從分子水平上檢測(cè)小鼠是否存在綠色熒光蛋白，可采用抗原-抗體雜交法。