Question

【題目】“生物導彈”可用于殺死人類某些癌細胞，制備“生物導彈”是單克隆抗體的重要應用之一，其過程如下圖所示。請據(jù)圖回答：

（1）在①-⑤批量生產(chǎn)A蛋白抗原的過程中，要快速獲得大量的A基因可采用_____技術(shù)。 在該技術(shù)中，解旋的方法是_______。

（2）在⑥-⑨批量生產(chǎn)“生物導彈”的過程中，⑦過程所用的“脾臟中的細胞”為_______，⑦過程區(qū)別于植物體細胞雜交技術(shù)所特有的誘導因素是_______，要得到所需的雜交瘤細胞一般要經(jīng)過_____個階段篩選。

（3）培養(yǎng)雜交瘤細胞的培養(yǎng)液通常需要加入血清的作用是_______。

（4）步驟⑧獲得的單克隆抗體最終可以從_____（①小鼠腹水、②培養(yǎng)液）提取，抗體的靶向作用是利用了其_____的特點。

（5）單克隆抗體通過上圖所示的基因工程來制備，此技術(shù)的核心步驟是_______。

Answer 1

【答案】PCR 適當?shù)母邷靥幚?/span> B淋巴細胞（或漿細胞） 滅活的病毒處理 2 血清中還包含了一些動物的激素和酶等未知成分，可以促進細胞的生長發(fā)育 ①、② 特異性 基因表達載體的構(gòu)建

【解析】

1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)或注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
2、圖中①②③為基因工程，④為早期胚胎培養(yǎng)，⑤⑥提取A蛋白，注入到小鼠體內(nèi)獲取產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，⑦是細胞融合，⑧是篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，制備單克隆抗體，進而制備生物導彈。

（1）為了快速的獲得A基因，可利用PCR技術(shù)在體外對DNA進行復制，PCR是利用高溫（90℃-95℃）解開雙鏈DNA。故在該技術(shù)中，解旋的方法是適當?shù)母邷靥幚怼?/span>

（2）過程⑦表示將受抗原刺激的B淋巴細胞（或漿細胞）和骨髓瘤細胞融合的過程，故⑦過程所用的“脾臟中的細胞”為B淋巴細胞（或漿細胞）；⑦過程區(qū)別于植物體細胞雜交技術(shù)所特有的誘導因素是用滅活的病毒處理；經(jīng)過誘導融合后可得到3種融合的細胞和未融合的細胞，經(jīng)過選擇培養(yǎng)基的篩選可得到雜交瘤細胞，再經(jīng)過單一抗體陽性檢測篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，即該過程需要經(jīng)過兩個階段的篩選。

（3）由于血清中包含了一些動物的激素和酶等未知成分，可以促進細胞的生長發(fā)育，故培養(yǎng)雜交瘤細胞的培養(yǎng)液通常還需要加入血清。

（4）雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)時，可用培養(yǎng)基培養(yǎng)或注入小鼠腹腔中培養(yǎng)，最后可從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。故步驟⑧獲得的單克隆抗體最終可以從①、②中提取。抗體與抗原可發(fā)生特異性結(jié)合，故抗體的靶向作用是利用了其特異性的特點。

（5）單克隆抗體還可通過基因工程來制備，此技術(shù)的核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建，所用的工具酶是限制酶和DNA連接酶。