Question

【題目】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，將PVY﹣CP基因?qū)�入馬鈴薯，使之表達即可獲得抗PVY病毒馬鈴薯，而PVY﹣CP基因位于某種環(huán)狀DNA分子中．如圖1表示獲得抗病毒馬鈴薯的操作過程，其中①﹣⑧表示步驟，NPTⅡ基因是卡那霉素抗性基因，圖中農(nóng)桿菌不含此基因．表是圖中限制酶識別序列和切割位點．

（1）步驟②中Klenow酶能將DNA片段的粘性末端變成平末端，且DNA長度不變，據(jù)此推測，其功能與下列酶的功能相同的是_____

A．限制性核酸內(nèi)切酶 B．解旋酶 C．DNA連接酶 D．DNA聚合酶

（2）由步驟②所獲取的片段中，圖1中BamHⅠ的酶切位點位于_____．

（3）由步驟③獲取的目的基因有_____個粘性末端；步驟④中選用的限制酶是_____；經(jīng)步驟⑤所形成的結(jié)構是_____．

（4）為了篩選農(nóng)桿菌，可以在培養(yǎng)基中加入_____進行篩選．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得含目的基因的馬鈴薯細胞，進而通過_____技術獲得抗PVY病毒馬鈴薯苗，最后進行相關的鑒定．

Answer 1

【答案】D C 1 BglⅡ或SmaⅠ 重組質(zhì)粒 卡那霉素 植物組織培養(yǎng)

【解析】

分析題圖：圖示是獲得抗病毒馬鈴薯的部分操作，步驟①～③是從質(zhì)粒A中獲取目的基因（PVY-CP）的過程；質(zhì)粒B是選用的運載體；④過程需要用限制酶處理質(zhì)粒B；⑤表示基因表達載體的構建過程，該過程需要DNA連接酶。

（1）步驟②中Klenow酶能將DNA片段的粘性末端變成平末端，且DNA長度不變，說明Klenow酶能催化DNA鏈的合成，從而將DNA片段的粘性末端變成平末端。

A、限制性核酸內(nèi)切酶的作用是切割DNA片段，形成黏性末端，A錯誤；

B、解旋酶的作用是將DNA雙螺旋解成單鏈，B錯誤；

C、DNA連接酶的作用是連接DNA片段的黏性末端，C錯誤；

D、DNA聚合酶的作用是催化DNA鏈的合成，D正確。

故選：D。

（2）由于經(jīng)HindⅢ酶切割后，該DNA為鏈狀DNA，則末端D點為HindⅢ切割點，故圖1中BamHⅠ的酶切位點位于 C。

（3）據(jù)圖示可知，由步驟③獲取的目的基因一端平齊，一端為粘性末端，故共有1個粘性末端；由于目的基因只有一個粘性末端，故需選擇一種粘性末端相同的限制性內(nèi)切酶，另一種選擇平末端限制酶，故步驟④中選用的限制酶是BglⅡ或SmaⅠ；經(jīng)步驟⑤所形成的結(jié)構是重組質(zhì)粒。

（4）為了篩選農(nóng)桿菌，可以在培養(yǎng)基中加入卡那霉素進行篩選，卡那霉素抗性基因常作為標記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得含目的基因的馬鈴薯細胞，進而通過植物組織培養(yǎng)技術獲得抗PVY病毒馬鈴薯苗，最后進行相關的鑒定。