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        1. 【題目】如圖1為某種常用質粒的序列圖,Lac Z基因編碼的酶能使無色的X﹣gal變?yōu)樗{色,Ampr為氨芐青霉素抗性基因.圖2為目的基因的序列及其相關限制酶的識別序列.請回答下列問題:

          (1)若要篩選成功導入目的基因的重組質粒,培養(yǎng)基中應加入的物質有______________,構建重組質粒時需要的工具酶有___________,對獲取的目的基因可用PCR技術對其擴增.

          (2)實驗小組用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割目的基因和質粒,構建重組質粒后導入大腸桿菌中,在篩選重組質粒的培養(yǎng)基上,若大腸桿菌菌落顯藍色,說明導入了__________.沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌_____(填“能”或“不能”)在該培養(yǎng)基上生存.

          (3)若質粒和目的基因用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割后,用DNA連接酶相連,然后再用BamH I和EcoR I切割成功連接后的重組質粒,可獲得長度不同的_____種DNA片段.

          【答案】X-gal、氨芐青霉素 限制酶、DNA連接酶 未導入目的基因的空質粒 不能 4

          【解析】

          分析題圖:質粒中,抗氨芐青霉素抗性基因(Amp')和LacZ基因都屬于標記基因,含有目的基因的外源DNA分子上存在BamHⅠ和BlgⅡ兩種酶的酶切位點,質粒上存在BamHⅠ和EcoRⅠ兩種酶的酶切位點。一般為了防止目的基因和質粒反向連接,用兩種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒。

          1)由于LacZ基因編碼的酶能使無色的X-gal變?yōu)樗{色,Amp為氨芐青霉素抗性基因,所以若要篩選成功導入目的基因的重組質粒,培養(yǎng)基中應加入的物質有X-gal和氨芐青霉素。構建基因表達載體時,首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體,其次用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA。

          2)構建重組質粒后導入大腸桿菌中,在篩選重組質粒的培養(yǎng)基上,由于LacZ基因編碼的酶能使無色的X-gal變?yōu)樗{色,若大腸桿菌菌落顯藍色,說明導入的是不含目的基因的空白質粒。若大腸桿菌菌落顯白色,說明LacZ基因被破壞,不能編碼相應的酶,所以導入的是重組質粒。沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌不含氨芐青霉素抗性基因,所以不能在該培養(yǎng)基上生存。

          3BamHIBglII兩種限制酶切割形成的黏性末端相同,可在DNA連接酶的作用下連接起來。若質粒和目的基因用BamHIBglII兩種限制酶切割后,用DNA連接酶相連,可能會發(fā)生正向連接,也可能會發(fā)生反向連接。用BamHIEcoRI切割成功連接后的重組質粒,若正向連接,切割后會得到兩種長度不同的DNA片段,若反向連接,切割后會得到另外兩種長度不同的DNA片段,因此,用BamHIEcoRI切割成功連接后的重組質粒,可獲得長度不同的4DNA片段。

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          培養(yǎng)基

          基本培養(yǎng)基

          乙+戊

          甲+丁

          戊+丙

          乙+丁

          甲+丙

          丁+戊

          生長狀態(tài)

          +

          +

          +

          A.B.C.D.

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