Question

小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎(jiǎng)。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。
①胚胎干細(xì)胞的獲得；
②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；
③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；
④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；
⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過(guò)胚胎移植使其生長(zhǎng)為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，然后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測(cè)。
異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動(dòng)物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問(wèn)題：
（1）構(gòu)建重組載體過(guò)程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入              ；
（2）上述過(guò)程中所需的胚胎通常通過(guò)供體獲得，再將處理過(guò)的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對(duì)供體和受體進(jìn)行              處理，若想培養(yǎng)出多個(gè)性狀表現(xiàn)一致的個(gè)體，可通過(guò)              技術(shù)；
（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動(dòng)物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪�從動(dòng)物體內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過(guò)              、              等過(guò)程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；
（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動(dòng)子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個(gè)啟動(dòng)子缺失的正向選擇基因，同時(shí)目的基因片段也不包含該基因的啟動(dòng)子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點(diǎn)基因啟動(dòng)子的作用下得以表達(dá)，使陽(yáng)性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對(duì)細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽(yáng)性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過(guò)程是              。

Answer 1

（1）啟動(dòng)子和終止子（兩者都填才給分）
（2）同期發(fā)情處理  胚胎分割移植  
（3）特定的選擇培養(yǎng)基、（動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)） 抗體陽(yáng)性檢測(cè)  
（4）在培養(yǎng)基中加入G418（1分），然后培養(yǎng)處理過(guò)的細(xì)胞，能正常生長(zhǎng)并增殖的細(xì)胞（1分）便是擊中的細(xì)胞

解析