Question

（7分）降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學機構為了研發(fā)一種活性高、半衰期長的新型降鈣素，從預期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖。在此過程中發(fā)現(xiàn)，合成較長的核苷酸單鏈易產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。分析回答下列問題：

（1）Klenow酶是一種_______酶，合成的雙鏈DNA有_______個堿基。

（2）獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ（識別序列和切割位點-G↓AATTC-）和BamHⅠ（識別序列和切割位點-G↓GATCC-）雙酶切后插入到大腸桿菌質粒中，篩選含重組質粒的大腸桿菌并進行DNA測序驗證。

①大腸桿菌是理想的受體細胞，這是因為它有_________________________的優(yōu)點。

②設計EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是___________________________。

③要進行重組質粒的鑒定和選擇，需要大腸桿菌質粒中含有_______________。

（3）經(jīng)DNA測序表明，最初獲得的多個重組質粒，均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列，最可能的原因是_______________（2分）。

 

Answer 1

【答案】

（7分）

（1）DNA聚合 252

（2）①繁殖快，單細胞，遺傳物質相對較少    ②保證目的基因和載體的定向連接    ③標記基因

（3）合成的核苷酸單鏈較長，產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。（2分）

【解析】

試題分析：

（1）Klenow 酶催化了原料按照模板鏈通過堿基互補配對相連，故屬于DNA 聚合酶；合成雙鏈后堿基對數(shù)是72×2－18，共252個堿基；

（2）①大腸桿菌具有繁殖快、代謝旺盛等特點；②若只用一種限制酶處理，則目的基因和載體的末端可以任意連接，可形成多種重組體、環(huán)狀DNA等，用兩種限制酶處理后可保證目的基因和載體定向連接；③要進行重組質粒的鑒定和選擇，需要大腸桿菌質粒中含有標記基因；

（3）經(jīng)DNA測序表明，最初獲得的多個重組質粒，均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列，最可能的原因是合成的核苷酸單鏈較長，產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。

考點：本題考查基因工程的知識。意在考查能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯(lián)系，能用文字、圖表以及數(shù)學方式等多種表達形式準確地描述生物學方面的內容的能力。