Question

【題目】研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達(dá)的H蛋白在多種癌細(xì)胞特別是乳腺癌細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)�？�H蛋白單克隆抗體能抑制過(guò)量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，目前已成為治療乳腺癌有效的生物制劑。

（1）H蛋白在成年個(gè)體的正常組織中表達(dá)量________(填低或高)。H蛋白是一種跨膜蛋白，結(jié)構(gòu)如圖所示。制備免疫小鼠所需H蛋白(抗原)時(shí)，應(yīng)構(gòu)建________區(qū)基因，轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞表達(dá)并提純。

（2）為擴(kuò)增出大量目的基因需用到PCR技術(shù)。常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、復(fù)性、延伸等步驟，復(fù)性(55～60 ℃)時(shí)__________________________堿基互補(bǔ)配對(duì)。設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)的關(guān)鍵之一，某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物如下表所示，其中引物對(duì)________(填A或B)設(shè)計(jì)不合理。

引物對(duì)A	P1　GTCCGCTAGTGGCTGTG P2　AGCTGGCGTTTAGCCTCG
引物對(duì)B	S1　AAGCCGGGCGCGCCCGGAA S2　TTCGGCCCGCGTTATGCGCG

（3）制備抗H蛋白單克隆抗體時(shí)，需將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，這樣做的目的是使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生_________________________________。

（4）治療乳腺癌時(shí)，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，也可以將__________________________結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，殺死癌細(xì)胞。

Answer 1

【答案】低 胞外 引物與模板DNA單鏈 B 分泌抗H蛋白抗體的B淋巴細(xì)胞(或漿細(xì)胞) 抗H蛋白單克隆抗體與抗癌藥物

【解析】

單克隆抗體的制備過(guò)程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有：物理法（離心、振動(dòng)）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）。

（1）由題意可知，H蛋白在多種癌細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)，因此H蛋白在成年個(gè)體的正常組織中表達(dá)量低。H蛋白為跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，其中胞外區(qū)可被免疫系統(tǒng)識(shí)別，故制備免疫小鼠所需H蛋白時(shí)，應(yīng)構(gòu)建胞外區(qū)基因。

（2）常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、復(fù)性、延伸等步驟，復(fù)性(55～60 ℃)時(shí)，引物和模板DNA單鏈堿基互補(bǔ)配對(duì)，以便DNA子鏈延伸。引物對(duì)B的S1、S2存在大量可以互補(bǔ)配對(duì)的堿基對(duì)，可能會(huì)發(fā)生自身堿基互補(bǔ)配對(duì)或者S1和S2部分發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，而失去與模板鏈結(jié)合的機(jī)會(huì)，因此其設(shè)計(jì)不合理。

（3）制備抗H蛋白單克隆抗體時(shí)，H蛋白為抗原，將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，會(huì)發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特異性的漿細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生抗H蛋白的抗體。

（4）治療乳腺癌時(shí)，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，通過(guò)抗原、抗體結(jié)合，最終清除癌細(xì)胞，也可以將抗H蛋白單克隆抗體和抗癌藥物結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，雙重作用殺死癌細(xì)胞。