Question

【題目】紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的。某實(shí)驗(yàn)小組欲完成血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：

（1）血紅蛋白在人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞中負(fù)責(zé)__________________的運(yùn)輸。

（2）實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液（預(yù)先加入檸檬酸鈉），馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。

①以上所述的過程即是樣品處理，它包括紅細(xì)胞洗滌、_______、分離血紅蛋白溶液、_____。

②紅細(xì)胞洗滌的目的是_______，將離心后得到的下層紅細(xì)胞液體中加入________進(jìn)行洗滌。

③分離血紅蛋白溶液操作中離心后，從上往下數(shù)，第________層是血紅蛋白的水溶液。

（3）凝膠色譜分離血紅蛋白，裝填色譜柱時(shí)應(yīng)將凝膠懸浮液___________地倒入色譜柱內(nèi)，如果有氣泡必須重裝，原因是氣泡會(huì)___________。

（4）（如圖）a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是_________。

Answer 1

【答案】O2和CO2 血紅蛋白的釋放 透析 去除雜蛋白 五倍體積的生理鹽水（答出生理鹽水給分） 3 均勻 攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 a

【解析】

1、題圖所給是分離蛋白質(zhì)的方法是根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量的大小進(jìn)行的分離。

2、血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。
樣品處理包括四個(gè)步驟，即紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液和透析。
透析袋是利用半透膜制作的，半透膜可以讓小分子可以自由進(jìn)出，而大分子不能通過。
樣品純化的目的是通過凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)除去。

（1）血紅蛋白的主要功能是攜帶O2和CO2。

（2）①樣品處理又包括紅細(xì)胞洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液和透析4步。

②紅細(xì)胞洗滌的目的是去除雜蛋白，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水洗滌。

③分離血紅蛋白溶液：試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。血紅蛋白混合液在離心管中離心后，從上往下數(shù)第3層是紅色透析液體即為血紅蛋白的水溶液。

（3）凝膠色譜分離血紅蛋白，裝填色譜柱時(shí)應(yīng)將凝膠懸浮液均勻地倒入色譜柱內(nèi)，裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一且發(fā)現(xiàn)氣泡必須重裝，這是因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。

（4）分離蛋白質(zhì)的方法是凝膠色譜法，從圖中可以看出a的相對(duì)分子質(zhì)量比b的大，因此a無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，因此a先從層析柱中洗脫出來。