Question

【題目】科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖，請(qǐng)回答下列問題：

（1）圖中卵母細(xì)胞應(yīng)在體外培養(yǎng)到______期，步驟①應(yīng)先對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行______處理。

（2）由圖可知，步驟②要分離出ES細(xì)胞，需將重組胚胎培養(yǎng)到______期。

（3）步驟③選擇ES細(xì)胞作為受體細(xì)胞而不是上皮細(xì)胞，是因?yàn)镋S細(xì)胞______，該過程需要先利用______技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因，其前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成______。

（4）步驟④應(yīng)在培養(yǎng)液中加入______。為檢測干擾素基因是否在小鼠體內(nèi)成功表達(dá)，可以采用______技術(shù)。

Answer 1

【答案】MII中（減數(shù)第二次分裂中） 去核 囊胚 在功能上具有發(fā)育的全能性 PCR 引物 分化誘導(dǎo)因子 抗原-抗體雜交

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程，其中①表示獲得重組細(xì)胞的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

（1）過程①獲得重組胚胎之前需要通過核移植技術(shù)獲得重組細(xì)胞，接受細(xì)胞核的去核卵母細(xì)胞應(yīng)該處于MⅡ期。

（2）ES細(xì)胞可以從囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出來。

（3）步驟③選擇ES細(xì)胞作為受體細(xì)胞，是因?yàn)?/span>ES細(xì)胞在功能上具有發(fā)育的全能性；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞前，需要構(gòu)建含有目的基因（干擾素基因）的表達(dá)載體。PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，其前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成引物。

（4）步驟④應(yīng)在培養(yǎng)液中加分化誘導(dǎo)因子。為檢測目的基因的表達(dá)情況，可采用抗體-抗原雜交技術(shù)，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已成功表達(dá)。