Question

(1)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)在生物工程中相當(dāng)重要。請(qǐng)簡(jiǎn)述PCR擴(kuò)增目的基因的基本過程。______________________________。

(2)制備培養(yǎng)基方法：將蛋白胨、NaCl和牛肉膏放入燒杯內(nèi)，加200 mL蒸餾水，用玻璃棒攪勻后，在酒精燈上加熱。當(dāng)?shù)鞍纂恕⑴Ｈ飧嗳芑�后，加入瓊脂，用微火繼續(xù)加熱至瓊脂熔化，補(bǔ)充水至200 mL。用0.1 mol/L的NaOH或0.1 mol/L的HCl將pH調(diào)至7.0～7.2，分別對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。當(dāng)培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃時(shí)，將其分裝在5套培養(yǎng)皿中，在酒精燈火焰附近倒平板，當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至室溫，按下表分別進(jìn)行處理。將處理完畢的培養(yǎng)基置于35 ℃的溫度下培養(yǎng)2～3天，觀察每個(gè)培養(yǎng)基中的細(xì)菌生長(zhǎng)情況。請(qǐng)回答下列問題：

第1套	開蓋，在空氣中暴露10 s
第2套	用手指接觸培養(yǎng)基約10 s
第3套	用硬幣接觸培養(yǎng)基約10 s
第4套	用濾紙擦一下課桌，再接觸培養(yǎng)基約10 s
第5套	(不打開蓋)

①上述實(shí)驗(yàn)中有哪些是無菌操作______________。

②第5套培養(yǎng)皿的作用是________。如果其培養(yǎng)基表面有菌落生長(zhǎng)，說明___________________。

③在1到4套的培養(yǎng)基中都出現(xiàn)了不同形態(tài)的菌落，原因是____________。

能否說菌落的形態(tài)越多，用來接觸的物體吸附的細(xì)菌數(shù)目就越多，為什么？

________________。

④實(shí)驗(yàn)中，有三處特別強(qiáng)調(diào)溫度控制，請(qǐng)簡(jiǎn)要說明其控制溫度的科學(xué)道理。

高壓蒸汽滅菌后“培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃時(shí)”才倒平板： ___________。

“當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至室溫，按下表分別進(jìn)行處理”：____________________。

“將處理完畢的培養(yǎng)基置于35 ℃的溫度下培養(yǎng)”：_____________________________。

 

Answer 1

(1)目的基因DNA受熱變性成為單鏈→引物與單鏈結(jié)合成互補(bǔ)序列→在DNA聚合酶作用下延伸→重復(fù)循環(huán)完成擴(kuò)增(其他合理答案亦可)

(2)①高壓蒸汽滅菌，在酒精燈火焰附近倒平板

②對(duì)照　培養(yǎng)基受到細(xì)菌污染

③培養(yǎng)基中接入了不同種類的細(xì)菌

不能，菌落的形態(tài)越多，只能說明接觸的物體中細(xì)菌的種類越多，菌落數(shù)越多才能說明細(xì)菌數(shù)多

④防止培養(yǎng)基的溫度過高使培養(yǎng)皿因受熱不均而破裂 防止培養(yǎng)基溫度過高殺死接種在其上的細(xì)菌(或微生物)　讓細(xì)菌在適宜的溫度下快速生長(zhǎng)繁殖

 

(1)PCR的基本程序?yàn)槿齻�(gè)環(huán)節(jié)：變性、復(fù)性、延伸。

(2)高壓蒸汽滅菌和無菌區(qū)操作是無菌技術(shù)的基礎(chǔ)操作，滅菌是否合格，通過空白培養(yǎng)基的培養(yǎng)可以對(duì)照說明。注意與問題聯(lián)系，分析表格中的信息。