Question

【題目】加試題回答下列（一）、（二）小題：

（一）下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。

據(jù)圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含________的培養(yǎng)基上進行。

（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是________（填字母代號）。

A．ampR B．啟動子　　　　C．終止子 D．復制原點

（3）過程①可采用的操作方法是_______(填字母代號)。

A．農桿菌轉化 B．顯微注射 C．大腸桿菌轉化 D．細胞融合

（4）過程②采用的生物技術是______。

（5）對早期胚胎進行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體。這利用了細胞的_____性。

（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用_____（填字母代號）技術。

A．核酸分子雜交 B．基因序列分析 C．PCR D．抗原—抗體雜交

（二）利用廢棄的秸稈生產(chǎn)燃料乙醇，不僅緩解了資源危機、環(huán)境污染，同時更為可持續(xù)發(fā)展提供了保證。下面是利用玉米秸稈來生產(chǎn)乙醇的流程：

（1）從纖維素豐富的土壤中獲取微生物1，進行一系列的操作后，用 _________ 將菌種涂布在相應的固體培養(yǎng)基中。

（2）下列有關涂布分離法的敘述錯誤的是_______

A．從土壤稀釋液中取樣時，不能只取懸液

B．接種時，涂布工具需先在酒精燈火焰上引燃

C．培養(yǎng)后菌落在整個平板表面分散均勻

D．涂布分離法比劃線分離法更易獲得單菌落

（3）為了提高生產(chǎn)效率，也可通過培養(yǎng)微生物1獲得 ______________酶，并將該酶固定在某介質上制成固定化酶。

（4）微生物2通常是_______________，為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，接種微生物2時要注意避免_____________，發(fā)酵時要注意_____________。這樣得到的乙醇濃度不會很高，最高是_________，所以要對生產(chǎn)出來的乙醇經(jīng)過蒸餾、提純等加工，才可以得到濃度大于90%的燃料乙醇。

Answer 1

【答案】HindⅢ和BamHⅠ 氨芐青霉素 B B 胚胎移植技術 全能 D 玻璃刮刀 A 纖維素酶 酵母菌 雜菌污染 無氧 16%

【解析】

據(jù)題（一）圖分析，根據(jù)目的基因兩側的限制酶和質粒上的限制酶種類分析，應該選擇BamHⅠ、HindⅢ切割目的基因和質粒，且質粒上的四環(huán)素抗性基因被破壞，而氨芐青霉素抗性基因沒有被破壞。圖中過程①表示將目的基因導入受體細胞（動物細胞），常用顯微注射法；過程②表示胚胎移植。

據(jù)題（二）圖分析，微生物1將纖維素發(fā)酵產(chǎn)生葡萄糖，為纖維素分解菌；微生物2將葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，為酵母菌。

（一）（1）根據(jù)以上分析已知，圖中構建基因表達載體時，需要用HindⅢ和BamHⅠ同時酶切載體（質粒）和人乳鐵蛋白基因（目的基因）；由于酶切后質粒上的四環(huán)素抗性基因被破壞，而氨芐青霉素抗性基因沒有被破壞，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌應該用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基。

（2）基因表達載體的結構包括目的基因（人乳鐵蛋白基因）、啟動子、終止子、標記基因、復制原點，其中啟動子能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達，故選B。

（3）根據(jù)以上分析已知，過程①表示將目的基因導入受體細胞（動物細胞），常用顯微注射法，故選B。

（4）根據(jù)以上分析已知，過程②表示胚胎移植技術。

（5）對早期胚胎進行切割，獲得的多個小胚胎經(jīng)過胚胎移植后發(fā)育為多個新個體，利用了細胞的全能性。

（6）人乳鐵蛋白是目的基因（人乳鐵蛋白基因）表達的產(chǎn)物，而檢測目的基因在受體細胞中是否表達，常采用抗原-抗體雜交技術，故選D。

（二）（1）根據(jù)題意分析可知，對土壤中獲取微生物1進行的是涂布分離法，稀釋后應該用玻璃刮刀將菌種涂布在相應的固體培養(yǎng)基中。

（2）A、從土壤稀釋液中取樣時，應該取懸液進行涂布，A錯誤；

B、為了防止雜菌污染，接種時，涂布工具需先在酒精燈火焰上引燃，B正確；

C、培養(yǎng)后菌落在整個平板表面應該分散均勻，C正確；

D、涂布分離法比劃線分離法更易獲得單菌落，D正確。

故選A。

（3）通過培養(yǎng)微生物1獲得纖維素酶，并將該酶固定在某介質上制成固定化酶，可以提高生產(chǎn)效率。

（4）根據(jù)以上分析已知，微生物2應該是酵母菌，其通過無氧呼吸產(chǎn)生乙醇，因此為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，接種酵母菌時要保證無菌（為了防止雜菌污染）、無氧的條件；這樣得到的乙醇濃度不會很高，最高是16%。